الصبغ السالب للبكتيريا , Negative staining

تـمـهـيد :

في هذا النوع من الصبغات عند خلط خلايا بكتيرية بمعلق من محلول النجروسين Nigrosin أو الحبر الهندي Indian ink أو الأيوسين ( وهي من الصبغات الحامضية أي لديها أيون سالب ) ثم يفرد الغشاء ويترك ليجف في الهواء فإن الصبغة تتكدس حول الخلايا البكتيرية التي تظل شفافة في وسط أسود بسبب أن الصبغة تحمل شحنة سالبة مماثلة للشحنة التي تحملها جدر الخلايا البكتيرية فيحدث بينهما تنافراً فتتجمع جزيئات الصبغة حول الخلية البكتيرية فتظهر شفافة.
وتسمى هذه الطريقة بالصبغ السالب أو الصبغ غير المباشر حيث يصبغ الوسط المحيط بالخلية البكتيرية (الشريحة الزجاجية) دون التعرض للخلايا البكتيرية فتظهر شفافة بدون لون .
والهدف من هذه الصبغة هو التعرف على أشكال الخلايا البكتيرية و أحجامها دون تعريض الخلايا البكتيرية لإي معاملات حرارية أو كيميائية وعادة تكون أشكال وأحجام الخلايا واضحة عند استخدام هذه الطريقة أكثر منها في حال استخدام الصبغ المباشر.

المواد والأدوات اللازمة :
مزارع بكتيرية ذات أشكال مختلفة – شرائح فارغة – صبغة النجروسين – ابرة ذات عقدة – حامل – حوض غسيل.

خطوات العمل :
1- ضع قطرة من صبغة النجروسين على أحد طرفي الشريحة.
2- عقم إبرة التلقيح ذات العقدة ثم خذ مسحة من أحد المزارع البكتيرية (لوب واحد) أو غمسة من المعلق البكتيري واخلطها جيداً بقطرة النجروسين.
3- باستخدام شريحة أخرى نضعها بزاوية 45 ْ ثم نفرد القطرة على الشريحة جيداً.
4- نترك الشريحة في هواء المعمل حتى تجف تماماً (لمدة 15-20 دقيقة) نلاحظ عدم استعمال الحرارة حتى لا يتشقق الغشاء البكتيري .
5- افحص الشريحة بالعدسة الزيتية وسجل النتائج ملاحظاً عدم اصطباغ الخلايا ولكن يصبغ محيط الخلية ( الشريحة ) .